简述pcr的基本原理
基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。 扩展资料 在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： 1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。 2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的`半保留复制链。 重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR技术的原理是什么?
PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。PCR技术的应用：PCR技术首次临床应用就是从检测镰状细胞和β-地中海贫血的基因突变开始的。PCR在医学检验学中最有价值的应用领域就是对感染性疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。PCR技术不但能有效的检测基因的突变，而且能准确检测癌基因的表达量，可据此进行肿瘤早期诊断、分型、分期和预后判断。
简述PCR技术操作步骤
原理：
DNA聚合酶链式反应技术简称PCR技术，是一种以模板DNA为基础，在引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，利用DNA聚合酶的酶促反应，完成对模板的目的片段的快速扩增的过程。
步骤为：
(1)变性：双链DNA在94℃条件下，通过热变性使模板的双链DNA氢键断裂变成单链。
(2)复性：当变性温度突然降至引物Tm值(通常为35～65℃)以下时，会使引物与模板DNA互补序列杂交。由于引物一般由10～25个碱基序列，模板DNA结构远比引物分子复杂，且反应体系中引物分子的浓度又远大于模板DNA，故在退火温度时，引物与模板DNA容易结合形成互补链。
(3)延伸：在DNA聚合酶的作用下，以DNA为模板和以4种脱氧核糖核苷酸为原料，在Mg2+存在的条件下。DNA聚合酶依赖于其5'→3'的聚合酶活力，以引物结合于DNA模板链为起始点。使引物的序列得以延伸，合成模板DNA的互补链。
pcr过程是什么？
pcr过程是包括高温变性，低温退火，中温延伸三个不同的事件。变性加热使模板DNA在高温下双链间的氢键断裂而形成两条单链。退火使溶液温度降至50到60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合，延伸溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸。pcr含义概况聚合酶链式反应PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史残骸，还是所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。
PCR反应的三个步骤是什么？
标准的PCR过程分为三步（如图所示）：
1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下,
氢键断裂,形成单链DNA
2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低,引物与
DNA模板结合,形成局部双链.
3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活
性）的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延
伸,合成与模板互补的DNA链.
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍.
现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.
pcr技术的原理是什么？
PCR技术的基本原理类似于DNA天然复制的一个过程，pcr技术的特异性主要是依赖于与靶序列的寡核苷酸引物。PCR技术其实是一种体外的DNA 产生扩增的技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将需要被扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经过一系列反应的多次循环，然后使DNA的片段在数量上可以增加，从而就可以在较短的时间内获得我们所需的特定的基因片段。扩展资料：Pcr技术具有特异性强、灵敏度高、简便快速、纯度要求低等特点。PCR产物的生成量是以指数方式增加的，PCR的灵敏度可达3个RFU；在细菌学中最小检出率为3个细菌。PCR反应用耐高温的聚合酶，一般在2-4 小时就可以完成扩增反应。而且不需要分离病毒或者是细菌及培养细胞等过程，DNA的粗制品以及RNA均可以作为扩增的模板。而且可直接用临床的标本如血液、洗嗽液、毛发、活组织等DNA的扩增检测。
